Pengembangan dan Validasi Metode Bioanalisis Trimetoprim dalam Sampel Plasma dan Urin Manusia Simulasi Menggunakan KCKT-PDA

Abstract

Untuk memantau kadar trimethoprim (TMP) pada manusia, diperlukan metode analisis yang tervalidasi, sederhana, dan hemat biaya untuk diterapkan secara rutin. Akan tetapi, sebagian besar metode yang digunakan untuk menetapkan kadar TMP dalam urin dan plasma menggunakan instrumentasi kompleks. Oleh karena itu, di dalam penelitian ini dikembangkan metode analisis berbasis Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) yang lebih sederhana. Pemisahan dilakukan menggunakan kolom GIST® C18 (150 × 4,6 mm, 5 µm) pada suhu 35°C yang dialiri dengan fase gerak berupa larutan asam asetat pH 2,5 : asetonitril (87:13, v/v) pada kecepatan 1,4 ml/menit. Deteksi dilakukan dengan Photodiode Array Detector (PDA) pada panjang gelombang 254 nm dan 243 nm untuk mengukur TMP dalam sampel urin dan plasma masing-masing. Penyiapan urin dan plasma secara berurutan dilakukan dengan metode ekstraksi cair-cair (ECC) menggunakan etil asetat dan presipitasi protein menggunakan asetonitril. Metode ini terbukti selektif, linier (R=0,997), akurat dengan %kesalahan ≤ 10,29% di tingkat LLOQ dan di atas LLOQ nilai %kesalahan ≤ 10,45%, presisi dengan %RSD ≤ 11,79% di tingkat LLOQ dan %RSD ≤ 10,82% di atas LLOQ. Selain itu, metode ini cukup sensitif untuk studi farmakokinetika dalam urin dan pemantauan kadar TMP dalam darah dengan LLOQ 5 mg/L baik dalam urin maupun plasma. Stabilitas trimethoprim dalam larutan, urin, dan plasma dilakukan untuk memastikan masa simpan. Metode yang dikembangkan terbukti sahih dan dapat diaplikasikan dalam studi farmakokinetika dan pemantauan kadar obat trimetoprim dalam urin dan plasma.